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小鼠腫瘤模型構(gòu)建

小鼠腫瘤模型構(gòu)建

簡(jiǎn)要描述:
關(guān)于小鼠腫瘤模型構(gòu)建的詳細(xì)方案,涵蓋常用方法(移植瘤、基因工程模型、致癌劑誘導(dǎo)等)及關(guān)鍵操作要點(diǎn)

更新時(shí)間:2025-07-02

訪問(wèn)量:10

廠商性質(zhì):其他

一、小鼠腫瘤模型構(gòu)建類型選擇

模型類型適用研究周期優(yōu)缺點(diǎn)
移植瘤模型藥物篩選、免疫治療2-6周操作簡(jiǎn)單,但微環(huán)境不完整
基因工程模型(GEMM)腫瘤發(fā)生機(jī)制、靶向治療3-12個(gè)月自發(fā)成瘤,接近人類腫瘤但成本高
化學(xué)/物理誘導(dǎo)環(huán)境致癌機(jī)制2-6個(gè)月多階段成瘤,適合特定癌種(如肝癌、肺癌)

二、小鼠腫瘤模型構(gòu)建移植瘤模型(皮下/原位)

1. 細(xì)胞來(lái)源

  • 細(xì)胞系:4T1(乳腺癌)、B16-F10(黑色素瘤)、HCT116(結(jié)腸癌)等。

  • 患者來(lái)源異種移植(PDX):將患者腫瘤組織移植至免疫缺陷鼠(NSG小鼠)。

2. 操作步驟(皮下移植)

  1. 細(xì)胞準(zhǔn)備

    • 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,胰mei消化后PBS重懸(活力>90%)。

    • 調(diào)整濃度:1×10?~1×10? cells/mL(根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整)。

  2. 接種

    • 小鼠腋下或背部皮下注射100-200μL細(xì)胞懸液(27G針頭)。

  3. 監(jiān)測(cè)

    • 每2-3天測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑(L)和短徑(W),體積公式:V = 0.5×L×W2。

    • 終點(diǎn):腫瘤體積≥1000mm3或出現(xiàn)潰瘍。

3. 原位移植(以肝癌為例)

  1. 手術(shù)暴露肝臟:麻醉后左肋下切口,暴露肝左葉。

  2. 注射細(xì)胞:緩慢注入50μL HepG2細(xì)胞懸液(5×10? cells)。

  3. 縫合監(jiān)測(cè):術(shù)后鎮(zhèn)痛,4周后Micro-CT評(píng)估腫瘤負(fù)荷。


三、基因工程自發(fā)模型(以KPC胰腺癌模型為例)

1. 轉(zhuǎn)基因小鼠

  • 品系:LSL-Kras?12?/+; Trp53?1?2?/+; Pdx1-Cre(KPC模型)。

  • 誘導(dǎo):Cre重組酶激活突變基因,胰腺自發(fā)成瘤(8-12周)。

2. 監(jiān)測(cè)

  • 超聲:檢測(cè)胰腺腫塊(≥3mm為陽(yáng)性)。

  • 血清標(biāo)志物:CA19-9(胰腺癌)、AFP(肝癌)。


四、化學(xué)誘導(dǎo)模型(以DEN誘導(dǎo)肝癌為例)

  1. Day 1

    • 14日齡小鼠腹腔注射二乙基亞硝胺(DEN,25 mg/kg)。

  2. Week 6-8

    • 飼喂含0.05%二乙基己xi雌酚(DEN-promoter)飼料。

  3. Week 20-30

    • 解剖觀察肝腫瘤結(jié)節(jié),計(jì)數(shù)并測(cè)量大小。


五、關(guān)鍵評(píng)估方法

1. 影像學(xué)

  • 小動(dòng)物超聲:高頻探頭(≥30MHz)測(cè)腫瘤血流信號(hào)。

  • 活體熒光成像(IVIS):適用于熒光標(biāo)記細(xì)胞(如Luciferase)。

2. 病理學(xué)

  • HE染色:評(píng)估腫瘤分化程度、壞死區(qū)域。

  • 免疫組化:Ki67(增殖)、CD31(血管生成)、TUNEL(凋亡)。

3. 免疫微環(huán)境分析

  • 流式細(xì)胞術(shù):檢測(cè)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(CD8+ T細(xì)胞、Treg)。


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